温中毓1,2丁荣明3胡育华2陆伟林1李青瑞2廖沁4周世菊4吕亮亮4王雅兰4谢家和1,5
（1.赣医院心内科；2.赣南医学院级硕士研究生；3.医院心内科；4.赣南医学院级硕士研究生；5.赣南医学院心脑血管疾病防治教育部重点实验室，江西赣州）
DOI：10./j.issn.-..02.
摘要目的探讨主动脉组织中S钙结合蛋白A8/A9（Scalcium-bindingproteinA8/A9，SA8/A9）表达与主动脉夹层（Aorticdissection，AD）发生的关系。
方法收集AD组和非主动脉夹层组（NAD）人群入院当天血常规、C反应蛋白、降钙素原、D-二聚体等指标及一般临床资料。运用蛋白质印迹（WesternBlot，WB）、免疫组化及实时荧光定量PCR（Real-timequantitativePCR，RT-qPCR）分别检测两组患者主动脉组织中的SA8/A9蛋白及mRNA表达水平；同时WB检测动脉组织中SA8/A9下游因子NLRP3、Caspase-1及IL-1β表达。
结果AD组患者入院收缩压、白细胞、C反应蛋白、降钙素原、D-二聚体高于NAD组，差异有统计学意义（P＜0.05）。AD组患者动脉组织中SA8/A9蛋白和mRNA表达高于NAD组；且NLRP3、Caspase-1及IL-1β在AD组患者动脉组织中表达高于NAD组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论SA8/A9及其下游因子NLRP3、Caspase-1及IL-1β在动脉夹层组织中表达增加，提示SA8/A9可能通过促进血管炎症反应参与动脉夹层的发生过程。
关键词主动脉夹层；S钙结合蛋白A8/A9；NLRP3；Caspase-1；IL-1β主动脉夹层（Aorticdissection，AD）是指主动脉壁内膜破裂，导致假腔和/或壁内血肿的形成及相应器官血流灌注受损，严重者可因动脉壁的破裂导致患者急性死亡［1］，致死率极高，达70%以上［2］。目前研究发现AD发病受多种因素共同影响，如动脉粥样硬化，细胞外基质降解、氧化应激、炎症反应等［3］。研究表明AD发展整个过程中均伴有炎症反应，炎症不仅是AD的触发因素还可促进疾病进展。此外，有研究结果表明多种炎症因子对AD的发展及预后具有预测功能［4］，但是至今还没有公认的生化指标用于指导AD的防治。近年来研究发现促炎因子钙结合蛋白家族中成员［S钙结合蛋白A8/A9（Scalcium-bindingproteinA8/A9，SA8/A9）］在多种心脑血管疾病中均升高，如脑梗死、心肌炎、急性冠脉综合征等［5-8］。让研究者感兴趣的是SA8/A9对AD的发病危险因素如动脉粥样硬化、氧化应激具有促进作用［9］，但是SA8/A9是否参与AD的发生，目前尚无研究报道。本研究通过检测AD患者与NAD人群之间动脉组织中SA8/A9及其下游相关因子水平，以期认识SA8/A9在AD的发展过程中的作用，并推测其可能的临床意义。1资料与方法1.1 一般资料收集—年在赣医院心胸外科住院接受主动脉置换术的AD患者的夹层部位组织6例为AD组，另取行心脏搭桥手术患者的动脉组织6例为NAD组。AD诊断标准：患者经过CT、CTA等影像学检查确诊为主动脉夹层（形成假腔或者游离瓣确诊为主动脉夹层）。同时均排除患有结缔组织病、肿瘤和全身感染性疾病的患者。AD组和NAD组（对照组）在年龄、性别构成等方面差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经赣医院医学伦理委员会批准，所有患者均自愿捐赠样本且对诊治知情同意并签署知情同意书。1.2 临床炎症指标测定抽取入选人群静脉血行血浆白细胞（WBC）、C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）等生化指标检测，具体操作由赣医院检验科完成，操作步骤参考检测仪器及试剂盒说明书。1.3 WB、免疫组化及RT-qPCR检测主动脉组织中的SA8/A9蛋白及mRNA表达水平；WB检测动脉组织中SA8/A9相关因子NLRP3、Caspase-1及IL-1β表达水平。1.4 观察指标比较两组患者的同型半胱氨酸（Hcy）、D-二聚体（D-D）、白细胞（WBC）、降钙素原（PCT）和C反应蛋白（CRP）指标水平并进行分析。1.5 统计学方法数据采用SPSS26.0统计软件进行分析，符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示，采用t检验比较组间差异，非正态分布以中位数表示，使用Mann-WhitneyU检验比较组间差异；计数资料用百分位数表示，采用卡方检验比较。P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1 AD组和NAD组临床资料比较AD组患者性别、年龄、高血压病史、吸烟史、入院时收缩压和舒张压，D-二聚体（D-D），同型半胱氨酸（Hcy）与NAD组无明显差异，而AD组患者白细胞（WBC）、降钙素原（PCT）和C反应蛋白（CRP）高于NAD组（P＜0.05），见表1。表1患者临床资料比较
2.2 SA8/A9在AD组和NAD组动脉组织中的表达分别采用WB、RT-qPCR和免疫组化技术检测AD组和NAD组中SA8/A9的表达水平，WB结果显示SA8/A9在AD组高于NAD组（图1A/B）。RT-qPCR的检测结果与WB一致，AD组中SA8/A9的表达高于NAD组（图1C）。免疫组化染色结果也显示SA8/A9在AD组表达升高（图1D、E），差异均有统计学意义（P＜0.05）。图1SA8/A9在AD患者动脉组织中的表达水平A-B：WB检测SA8/A9蛋白在非主动脉夹层组（NAD）和主动脉夹层组（AD）中的表达；C：RT-qPCR检测SA8/A9的mRNA在NAD组和AD组中的表达；D-E：免疫组化染色检测SA8/A9在NAD组和AD组中的表达（DAB显色法）。**表示P＜0.05。
2.3 NLRP3、Caspase-1和IL-1β在AD组和NAD组动脉组织中的表达使用WB实验方法对其相关下游因子NLRP3、Caspase-1及IL-1β进行检测，结果显示NLRP3、Caspase-1及IL-1β在AD组的表达水平高于NAD组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图2。图2NLRP3、Caspase-1和IL-1β在AD组动脉组织中的表达
A-B：WB检测NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白在NAD组和AD组动脉组织中的表达水平。
3讨 论我国流行病学调查结果显示，随着人口老龄化日益严重及生活方式的改变，AD的发病率呈上升趋势。目前随着影像学技术的发展及普及，其诊断已不难，但是因其缺乏早期的防治手段，AD患者死亡率并没有减低［10-12］，因此探索AD发病机制寻找有效的早期防治途径具有重要意义。既往研究表明，炎症是AD发生的重要机制，血管壁炎症细胞浸润可以触发炎症反应及增加基质金属蛋白酶（MMP）的分泌，从而导致弹性纤维降解及动脉壁中层结构破坏，最终促使AD形成［13］。此外，大量的研究已证实，炎症指标对AD的发生及预后评估有重要意义，根据国内外研究报道，炎症因子（CRP、PCT）水平与AD的发生及预后有密切关系，如CRP可作为评估AD患者预后的预测因子；CRP表达水平升高时AD患者住院死亡风险显著增加［14-16］。此外一项包含例AD患者的回顾性研究显示，其入院时高水平的D-二聚体与患者术后90d血管性事件发生呈正相关［17］。血管内皮细胞损伤及氧化应激导致PCT分泌增多，而血管内膜损伤和氧化应激是导致AD形成的重要环节［18-19］。高同型半胱氨酸（HHcy）通过促进血管炎症反应导致AD的发生，其机制可能与HHcy诱导炎症细胞募集及促进炎症细胞（IL-1、MCP-1）分泌，激活氧化应激反应，导致Fibrillin-1蛋白变性，而弹性蛋白异常聚集易被金属蛋白酶MMPs降解，进而加速血管壁重塑等有关［20-21］。以上结果表明炎症因子与AD之间存在密切关系，我们所收集的临床生化指标结果亦显示在AD组患者血清中CRP、D-D、HHcy及PCT表达高于NAD组。但是目前还没有关于PCT与AD之间关系的确切研究，还需要在动物实验及分子水平方面做进一步研究。近年来炎症因子SA8/A9受到广泛